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方案概述

前言：

山梨酸（Sorbic acid），化学名称为2,4-己二烯酸，是是一种国际公认的高效、低毒酸性防腐剂。它最初于1859年由德国化学家赫尔曼·冯·霍夫曼（Hermann von Hofmann）从花楸树的未成熟浆果中分离出来，因此得名。山梨酸及其钾盐（山梨酸钾）是国际上公认的高效、低毒的防腐剂，广泛应用于食品、饮料、化妆品及饲料等领域，用于抑制霉菌、酵母菌和需氧性细菌的生长，从而延长产品保质期。中国《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》）对山梨酸的使用范围和最大使用量有明确规定。例如，在面包、糕点中最大使用量为1.0 g/kg，在葡萄酒中为0.2 g/kg。美国FDA将其列为“一般认为安全”（GRAS）物质。尽管在正常使用范围内山梨酸是安全的，但过量摄入可能会对人体造成一定负担，长期大量摄入可能导致肠胃不适或加重肝肾代谢负担。对山梨酸过敏的人群可能会出现皮肤刺激或呼吸道不适。

本次实验参照GB 5009.28-2016 《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》采用英国365集团官网高效液相色谱仪LC3400系列配置紫外检测器进行测定某碳酸饮料中的山梨酸含量。实验结果显示，3.73mg/L标准品溶液连续进样6次，保留时间重复性RSD为0.093%，峰面积重复性RSD为0.329%，仪器精密度良好；在0.75~74.60mg/L范围内，线性相关系数大于0.9997，线性良好；某碳酸饮料中检出山梨酸，含量为93.77mg/kg，以上数据均满足标准方法对于仪器的要求。

关键词：山梨酸；食品添加剂；高效液相色谱法。

1.仪器设备及试剂

1.1 高效液相色谱配置清单

表1 仪器配置清单表

序号	名称	数量
1	LC3400液相色谱系统	1套
2	P3400B 二元高压泵	1台
3	CT3400 柱温箱	1台
4	AS3400 自动进样器	1台
5	UV3400 检测器	1台
6	SmartLab CDS 2.0色谱工作站	1套
7	Nova Atom SC18柱 4.6*250mm,5μm	1个

1.2 试剂及标准品清单

表2 试剂及标品清单表

序列	试剂及标准品	纯度
1	甲醇	HPLC级别
2	冰乙酸	AR级别
3	乙酸铵	AR级别
4	乙酸锌	AR级别
5	亚铁氰化钾	AR级别
6	甲醇中山梨酸钾标准溶液(1000mg/L)	-

1.3 实验材料及辅助设备

分析天平；

超声波清洗机；

涡旋混合器；

离心机。

2.实验方法

2.1 试剂配制

2.1.1 标准工作溶液：精密移取甲醇中山梨酸钾标准溶液1.0mL，置于10mL量瓶中，加入适量的水溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备液（100mg/L）；分别精密移取标准储备液适量置于不同容量瓶中，用水定容至刻度线，摇匀，得到1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L、20.00mg/L、50.00mg/L和100.00mg/L的标准工作溶液；

2.1.2 一般性试样：精密称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50°C水浴超声20min，冷却至室温后，加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中。于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5min，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22μm滤膜。

3.实验结果

3.1 标准品与空白谱图

图1 空白溶剂与标准品测试叠加色谱图

实验结果显示，标准品图谱中目标峰位置无杂质干扰，空白溶剂不干扰样品测定。

3.2 线性与范围

表3 标准曲线浓度表

组分名称	标曲1	标曲2	标曲3	标曲4	标曲5	标曲6	标曲7
山梨酸钾（mg/L）	1.00	2.00	5.00	10.00	20.00	50.00	100.00
山梨酸（mg/L）	0.75	1.49	3.73	7.46	14.90	37.30	74.60

图2 山梨酸标准曲线

实验结果显示，山梨酸浓度在0.75~74.60mg/L范围内，线性相关系数大于0.9997，线性良好。

3.3 精密度

图3 山梨酸标准品(3.73mg/L)测试图谱重叠图

表4 山梨酸标准品(3.73mg/L)测试数据

化合物名称	保留时间(min)	峰面积(mAU*s)
山梨酸	12.513	185.352
	12.515	183.842
	12.523	184.221
	12.529	183.911
	12.538	183.824
	12.541	183.794
平均值	12.526	184.157
SD	0.012	0.606
RSD（%）	0.093	0.329

实验结果显示，3.73mg/L标准品溶液连续进样6次，保留时间重复性RSD为0.093%，峰面积重复性RSD为0.329%，仪器精密度良好。

3.4 检出限

图4 山梨酸标准品(0.75mg/L)测试谱图

表5 山梨酸标准品(0.75mg/L)测试数据

名称	保留时间(min)	峰面积(mAU*s)	信噪比
山梨酸	12.503	37.492	711.205

实验结果显示，根据上表山梨酸浓度为0.75mg/L对照品测试数据，3倍信噪比为检出限计算可知山梨酸的检出限理论结果为3.164μg/L。

3.5 样品测定

图5 某碳酸饮料供试品溶液测试图谱重叠图

按外标法计算，样品检测结果如下：

样品名称	碳酸饮料
样品中山梨酸上机浓度（mg/L）	3.754
样品中山梨酸含量（mg/kg）	93.77

4.结论

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