方案概述
前言：
罗丹明B，又称玫瑰红B、若丹明B，是一种人工合成的碱性荧光染料，属于氧杂蒽类化合物。该物质本身具有鲜艳的玫瑰红色，易溶于水、乙醇等极性溶剂，最初广泛应用于纺织、印刷、荧光标记等工业领域。由于其成本低廉、着色力强，部分不法商家将其非法添加至食品中用于染色，如辣椒粉、花椒、肉制品、调味品等，成为危害食品安全的重要污染物。罗丹明B对人体具有明确的毒性，可通过消化道、皮肤等途径进入体内，干扰机体正常的生理代谢，同时具有潜在的致癌、致突变风险，被多个国家列为食品中禁止使用的非食用物质，是食品安全监管的重点对象，在各类调味品及加工食品中的检出率居高不下。
罗丹明B的食品污染主要源于非法添加行为，部分小作坊及不法商贩为提升食品外观色泽、掩盖劣质原料缺陷，违规将其掺入食品生产加工过程中。该物质化学性质稳定，具有良好的耐酸、耐碱及耐热性，常规的食品加工工艺（如蒸煮、油炸、腌制等）难以将其分解破坏，导致其在食品终端产品中易残留。人体摄入含有罗丹明B的食品后，短期会出现恶心、呕吐、头晕、腹痛等消化道及神经系统不适症状；长期低剂量摄入则会对肝脏、肾脏等重要脏器造成慢性损伤，诱发细胞突变，增加患癌风险，尤其对儿童、孕妇等特殊人群的危害更为显著。
本应用方案，依托英国365集团官网 LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统，建立了食品中罗丹明B的液相色谱-串联质谱检测方法。该方法可实现目标物的高效提取、精准分离与灵敏定量，有效排除食品基质的干扰，为食品中罗丹明B的快速筛查与准确定量提供可靠技术支持，助力食品安全监管工作的顺利开展。
关键词：食品安全；罗丹明B；液相色谱-串联质谱。
1.仪器设备及试剂
1.1 仪器配置
表1 仪器配置清单表
序号 | 名称 | 数量 |
1 | LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统 | 1台 |
2 | P3600B 二元高压恒流泵 | 1台 |
3 | CT3600 柱温箱 | 1台 |
4 | AS3600 超高效自动进样器 | 1台 |
5 | SmartLab CDS 2.0色谱工作站 | 1套 |
6 | C18 1.7 μm 2.1x50 mm | 1个 |
7 | NovaPre MCX （60mg/3mL）固相萃取柱 | 若干 |
1.2 试剂及标准品清单
表2 试剂及标品清单表
序号 | 试剂及标准品 | 规格 |
1 | 甲醇 | LC-MS级 |
2 | 乙腈 | LC-MS级 |
3 | 甲酸 | LC-MS级 |
4 | 罗丹明B | 1000 ppm |
1.3 实验材料及辅助设备
涡旋混合器；
高速离心机；
分析天平；
固相萃取装置（带真空泵）；
氮吹仪；
摇床。
2.实验方法
2.1 溶液配制
2.1.1 0.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸加入到500mL水中，混匀，用水定容至1000mL。
2.1.2 0.1%甲酸乙腈溶液：取1mL甲酸加入到500mL乙腈中,混匀，用乙腈定容至1000mL。
2.1.3 50%甲醇水溶液:准确量取 500 mL 甲醇于 1 L 容量瓶中，用水定容至刻度。
2.1.4含0.1%甲酸的50%甲醇水溶液:取1mL甲酸加入到500mL 50%甲醇水溶液中，混匀，用 50%甲醇水溶液定容至1000mL。
2.1.5含5%氨水的甲醇溶液：取 5 mL 氨水，用甲醇稀释至 100mL，混匀。
2.2 样本前处理
2.2.1 样品提取
准确称取 1 g辣椒粉试样置于 50 mL 塑料离心管中，准确加入 10.0 mL 含 0.1%甲酸的50%甲醇水溶液，混匀，加入陶瓷均质子两颗，于旋涡混匀器上涡旋 15 min，于 8000 r/min 离心 10 min，取 3 mL 提取液层溶液过 0.45 μm 有机相滤膜后待净化。
2.2.2 样品净化
NovaPre MCX固相萃取柱柱活化：使用前依次用 3 mL 甲醇，3 mL 水活化。
准确移取 1.0 mL 提取液至NovaPre MCX固相萃取柱中，依次用 3 mL 0.1%甲酸水溶液、3 mL 水、3 mL 甲醇淋洗固相萃取柱。用 6 mL 氨水甲醇溶液洗脱目标物，并收集洗脱液，洗脱溶液在 45℃下，用氮气吹至近干，残渣用 0.5 mL初始流动相溶解，过 0.22 μm 有机相滤膜上机测定。
2.3 实验条件
2.3.1 液相方法条件
色谱柱：C18 1.7 μm 2.1x50 mm；
流动相：A相： 0.1%甲酸水溶液；B相：0.1%甲酸乙腈溶液；
流速：0.4mL/min；
柱温：40 ℃；
进样体积：1 µL。
2.3.2 质谱方法条件
表3 化合物质谱参数
化合物名称 | 前体离子(m/z) | 产物离子(m/z) | 碰撞能量CE |
罗丹明B | 443.2 | 399.3* | 59 |
443.2 | 355.1 | 80 |
注：带*为定量离子
3.实验结果
3.1 标准品谱图
7分钟内完成罗丹明B的检测，如图1 化合物峰有良好的峰形，其响应良好，符合实验测定需求。
图1 罗丹明B的色谱图
3.2 线性范围
准确移取适量罗丹明B标准工作溶液，用初始流动相配制成标准曲线，线性范围为0.1-10 ng/mL，线性结果与已知浓度的偏差小于最大允许偏差，R²大于0.999，线性关系良好。
图2 罗丹明B标准曲线
3.3 定量限与检出限
本方法以0.1 ng/mL、0.5 ng/mL分别作为罗丹明B的检出限和定量限，其信噪比如下表，检出限信噪比大于3，定量限信噪比大于10。
表4定量限与检出限
化合物名称 | 检出限信噪比（0.1 ng/mL） | 定量限信噪比（0.5 ng/mL） |
罗丹明B | 65.6 | 126.845 |
图3 罗丹明B检出限信噪比（0.1 ng/mL）
图4 罗丹明B定量限信噪比（0.5 ng/mL）
3.4 重复性
取0.5、2、5 ng/mL三种浓度标准溶液，连续进样6针。结果如下表所示，高中低浓度罗丹明B保留时间，峰面积的相对标准偏差均在5%以内，满足实验要求。
表5 高中低浓度罗丹明B重复性测试
化合物 | 浓度(ng/mL) | 峰面积RSD（%） | 保留时间RSD（%） |
罗丹明B | 0.5 | 2.313 | 0.249 |
2 | 1.159 | 0.167 | |
5 | 2.526 | 0.285 |
图5 连续进样6针0.5 ng/mL罗丹明B的色谱图
图6 连续进样6针2 ng/mL罗丹明B的色谱图
图7 连续进样6针5 ng/mL罗丹明B的色谱图
3.5 加标回收
在样品A中加入标准溶液，使罗丹明B浓度增加2 ng/mL，连续6针进样测试，回收率为105.7%，RSD为1.473%，符合实验要求。
3.6 空白残留
在进样10 ng/mL标液后，进样空白溶剂，计算空白残留，结果如下图，空白残留小于线性最低点（0.1 ng/mL）的10%，符合实验要求。
图8 化合物空白色谱图
3.7 样品测定
样品A检出罗丹明B低于方法检出限。
图9 样品A的罗丹明B色谱图
4.结论
本方法使用英国365集团官网LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统建立罗丹明B液相色谱-串联质谱法检测方法。由数据可得该方法的色谱峰峰形良好、无拖尾，灵敏度符合实验要求，R²大于0.999，符合线性要求，高中低浓度的重复性在5%以内，空白残留小于线性最低点的10%，说明了该方法配备英国365集团官网液相色谱质谱联用系统满足对待测样本的常规性定性定量检测需求。
相关产品
如需下载完整解决方案，请填写以下信息。
